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6年前的一款U盤大小DNA測序儀終于有了新用途

發布時間:2018-02-09 來源:Heather Hamilto 責任編輯:lina

【導讀】便攜式DNA測序儀公司Oxford Nanopore Technologies在2012年發表了相當于一般U盤大小的USB測序備,其尺寸比一副紙牌更小。盡管具有創新性,但也存在不少問題——包括有一點延遲,有時也不太準確。該測序儀可從雙股螺結構中取得單鏈DNA,并經由蛋白質孔傳送少量的電流。


 
英國伯明翰大學(University of Birmingham)研究人員透過納米孔技術為Oxford Nanopore測序儀開發超長讀長,并擴展其功能為整個基因組進行測序。
 
便攜式DNA測序儀公司Oxford Nanopore Technologies在2012年發表了相當于一般U盤大小的USB測序設備,其尺寸比一副紙牌更小。盡管具有創新性,但也存在不少問題——包括有一點延遲,有時也不太準確。該測序儀可從雙股螺結構中取得單鏈DNA,并經由蛋白質孔傳送少量的電流。
 
根據美國科技網站Ars Technica報導,DNA的4個堿基(A、C、G、T)能以不同方式改變納米孔兩側電流與電壓,透過測量該電流與電壓的變化,就能分別對于單鏈DNA進行測序。
 
六年后的今天,研究人員由于關注這些蛋白質納米孔的特性,發現了該測序儀的新用途。在日前發表于《自然生物技術》(Nature Biotechnology)期刊的論文中,英國伯明翰大學的研究人員介紹該測序儀所提供的超長讀長(long read),以及如何將它用于為先前抗拒表征的人類基因組進行測序。該設備還可用于決定來自另一個基因的兩組染色體,為整個基因組定位表觀遺傳學控制的區域。
 
該測序儀的新用途是由英國伯明翰大學(University of Birmingham)微生物與感染學研究所教授Nick Loman和博士班研究生Josh Quick共同開發的。Quick在發展讀長方法方面扮演重要角色。
 
雖然該測序儀仍然易于出錯,但比起具有較高準確度的測序儀發生錯誤時卻更勝一籌,特別是在讀取具有超過200個堿基的DNA時。當DNA重復時,其他的軟件程序也沒輒了。而當高度準確的設備搭配Oxford Nanopore的小型設備使用時,可實現一種提供序列的折衷方案,并顯示該序列如何形成更大的部份。
 
該研究采用不同的軟件解決方案和電壓數據詮釋數據,探索幾種產生最佳納米孔測序的方法。研究人員以多種方法進行多次讀取和繪圖,最終達到了99.44%的準確率。
 
Ars Technica的報導中解釋,因為我們繼承了分別來自父母的兩個復制染色體——盡管版本不同,但底層的DNA是相同的。這意味著短讀長的DNA無法確定二者分別為何。因此,納米孔提供的長讀取極其關鍵。在實驗過程中,研究人員發現其讀長高達88.2萬個堿基,這是在最初的基因組測序計劃中無法實現的。研究人員并預測,這項新的應用將有助于填補原始基因組計劃中的所有空缺。
 
研究人員在研究過程中確實也遇到了一些挑戰。他們發現用于保存DNA數據的通用檔案規格無法處理過長的序列,導致分析軟件出現故障。當然,如果能更新軟件使其包含這項功能,那么未來應用可能性是無止境的。
 
Loman說:“即使是在一年前,實際上也還難以對整個人類的基因組進行測序,但得力于納米孔等技術近來的進展和創新,我們現在已能測序非常長的基因組片段。”他還把這種測序方法比喻為拼圖。
 
“在這項研究中,最重要的發現之一是,即使完成了人類基因組參考或者認為已經完成一段時間了,它仍然包含許多不足的部份,我們開發的新方法采用納米孔測序發展出超長讀長,從而縮短了序列中的一些差距。”





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